一次性使用日用品净化车间卫生管理制度
前 言
本标准全文强制。
自1996年发布以来，GB15979-1995《一次性卫生用品卫生标准》明确了生产企业的卫生要求和目标，管理部门也有监督检测的依据，在促进行业健康发展和提高卫生水平方面发挥了积极作用。同时，随着产品类型和材料的发展，该标准在某些地方需要改进。因此，提出修订本标准。
本标准自实施之日起取代GB1579-1995。
本标准附录A至附录G为标准附录。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。
本标准负责起草单位：上海市疾病预防控制中心；起草单位：宝洁（中国）有限公司、强生（中国）有限公司。
本标准主要起草人：沈伟、卢敏、杨宏平、周密、潘希和、刘育京。
中华人民共和国国家标准
一次性使用卫生用品卫生标准 GB15979-2002
Hygienic standard for disposable sanitary products 代替GB15979-1995
1、范围
本标准规范了一次性日用品设备和工作环境卫生管理制度、消毒灭菌实际效果、微生物检测评价规范及相应检测方法、原材料及商品生产、消毒灭菌、储存、运输全过程卫生要求和商品标志规定。
在本规范中，一次性日用品是指：
本规范应用于中国一次性日用品的生产、制造和销售。企业或者本人也适用于经销商进口一次性日用品的单位、企业或者本人。
2.引入规范。
下列规范中包含的法律规定，根据本规范的引入，构成本规范的法律规定。本规范出版发行时，所显示的版本号合理。所有规范均已修订，应用本规范的个人应讨论应用以下规范的最新概率。
GB15981-1995消毒灭菌实际效果评价方法及规范。
3.界定
本规范采用以下定义。
一次性使用日用品。
应用一次后丢失。与身体同时或间接接触的各种日常必需品，用于实现人体系统的环境卫生或卫生防疫(抑菌或抗菌)目的。商品的特点可以是固态的，也可以是液态的。比如一次性使用胶手套或护指(含卫生护垫)、尿布等粪便用品(不含走稳纸巾等卫生间拿纸)、避孕套等。，在本规范中统称为日用品。
4.商品食品卫生标准。
4.1外观一定要干净整洁，符合日用品的原有特点，不能有异常气味和脏东西。
4.2不能对皮肤和粘膜造成异常刺激和人民反应及其危害。
4.3商品必须符合表1中分子生物学指标值。
表1
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产品种类
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微生物指标
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初始污染菌1)
cfu/g
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细菌菌落总数cfu/g或cfu/mL
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大肠菌群
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致病性化脓菌2）
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真菌菌落总数cfu/g或cfu/mL
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|
手套或指套、纸巾、湿巾、内裤、电话膜
抗菌（或抑菌）液体产品
卫生湿巾
口罩
普通级
消毒级
妇女经期卫生用品
普通级
消毒级
尿布等排泄物卫生用品
普通级
消毒级
避孕套
|
≤10000
≤10000
≤10000
|
≤200
≤200
≤20
≤200
≤20
≤200
≤20
≤200
≤20
≤20
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不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
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不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
不得检出
|
≤100
≤100
不得检出
≤100
不得检出
≤100
不得检出
≤100
不得检出
不得检出
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1）如初识污染菌超过表内数值，应相应提高杀灭指数使达到本标准规定的细菌与真菌限值。
2）致病性化脓菌指绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌与溶血性链球菌。
|
4.4卫生湿巾除了必须符合表1中的微生物学标准外，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭率必须≥90%。如果需要注明对真菌的影响，白色念珠菌的杀灭率必须≥90%，其杀菌效果必须在室温下保持至少一年。
4.5除大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率必须≥50%（溶出性）或>26%（非溶出性）外，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率必须达到表1中同类产品的微生物学标准。如果需要注明对真菌的作用，白色念珠菌的抑菌率必须≥50%（溶出性）或>26%（非溶出性），其抑菌作用必须在室温下保持至少一年。
4.6任何经环氧乙烷消毒的卫生用品出厂时，环氧乙烷残留量必须≤250ug/g。
5.生产环境卫生指标。
5.1装配包装车间空气中细菌菌落总数应≤2500cfu/m3。
5.2工作台表面细菌落总数应≤20cfu/cm2。
5.3工人手表面细菌菌落总数应≤300cfu/只手，无致病菌检测。
6.生物监测评价消毒效果。
6.1环氧乙烷消毒:杀灭枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC9372)≥103.
6.2电离辐射消毒:短小杆菌芽胞E6d(ATCC27142)的杀灭指数应≥103.
6.3压力蒸汽消毒:嗜热脂肪杆菌(ATCC7953)的杀灭指数应≥103.
7.测试方法。
7.1产品测试方法。
7.1.1产品外观：目测应符合本标准3.1的规定。
7.1.2产品毒理学测试方法：见附录A。
7.1.3产品微生物检测方法：见附录B。
7.1.4产品杀菌性能.抗菌性能及稳定性测试方法：见附录C。
7.1.5产品环氧乙烷残留测试方法：见附录D。
7.2生产环境采样及测试方法：见附录E。
7.3生物监测评价方法：见附录F。
8.原材料卫生要求。
8.1原材料应无毒、无害、无污染；原材料包装应清洁，并明确说明内容的名称。生产单位、生产日期或生产批号；影响卫生治疗的原材料不得暴露；有特殊要求的原材料应标明保存条件和保质期。
8.2对影响产品卫生质量的原材料应有相应的检验报告或证明材料，必要时应进行微生物监测，并采取相应的措施。
8.3禁止使用废弃的卫生用品作为原料或半成品。
9生产环境及工艺卫生要求。
9.1生产区周边环境应整洁，无垃圾、蚊蝇等害虫滋生地。
9.2生产区域应有足够的空间来满足生产需要，布局必须满足生产过程的要求，合理的分割、人员和物体的转移，在产品过程中没有逆向和交叉点。应采取防污染措施和严格的操作程序，减少生产环境中的微生物污染。
9.3生产区应配备有效的防尘、防虫、防鼠措施、地面、墙壁、工作台面应平整、光滑、无灰尘。易于除尘、清洁和消毒，并采取足够的照明和空气消毒或净化措施，以确保生产环境符合本标准第五章的规定。
9.4配备必要的生产质检设备，有完整的生产质检记录，有效保证产品卫生质量。
9.5生产过程中使用易燃易爆物品或产生有害物质的，必须采取相应的安全防护措施，符合国家有关标准或规定。
9.6原材料和成品应分开堆放，待检验合格。不合格的原材料和成品应严格分开堆放，并设置明显标志。仓库应干燥、清洁、通风、防虫、防鼠设施和垫板，以满足产品储存条件。
9.7进入生产区时，应更换工作服和工作鞋，戴工作帽。直接接触裸体产品的人员应戴口罩、手或手套进行清洁消毒；生产区前应设置更衣室、洗手池、消毒池和缓冲区。
9.8从事卫生用品生产的人员应保持个人卫生，不得留指甲，工作时不得戴珠宝，长发应卷在工作帽上。痢疾、伤寒、病毒性肝炎、活动性肺结核、尖锐湿疣、淋病、化脓性或渗出性皮肤病患者或医院携带者不得直接参与产品接触的生产活动。
9.9从事卫生用品生产的人员应在上岗前定期（每年一次）进行健康检查和卫生知识培训（包括生产卫生、个人卫生、相关标准和规范），合格者方可上岗。
10.消毒过程要求。
10.1消毒产品的最终消毒必须采用环氧乙烷、电离辐射或压力蒸汽等有效消毒方法。所使用的消毒设备必须符合相关的卫生标准。
10.2根据产品卫生标准制定消毒程序。技术参数.工作制度，经验证后严格按照既定的消毒工艺操作。消毒程序。影响消毒效果的技术参数或原材料或生产工艺变更后，应重新验证确定消毒过程。
10.3每每个消毒过程中，必须监测相应的工艺（物理）和化学指示器。每月使用相应的生物指示器进行监测。只有当工艺监测、化学监测和生物监测符合规定要求时，消毒物品才能出厂。
10.4产品消毒后，外观和性能应与消毒前无明显差异。
11.包装、运输和储存要求。
运输或储存卫生用品的单位或个人，应严格按照生产者提供的运输和储存要求进行运输或储存。直接接触产品的包装材料必须无毒、无害、清洁，产品的所有包装材料必须具有足够的密封性和牢固性，以确保产品在正常运输和储存条件下不受污染。
12.产品标识要求。
12.1产品标识应符合《中华人民共和国产品质量法》的规定，并在产品包装上标明卫生标准号、生产日期、保质期（有效期）或生产批号和限定使用日期。
12.2消毒产品还应在销售包装上注明消毒、消毒日期、有效期、消毒批号和限定使用日期，并在运输包装上注明消毒、消毒单位和地址。消毒方法。消毒日期、有效期、消毒批号和限定使用日期。
附录 A
（标准的附录）
产品毒理学测试方法
A1 各类产品毒理学测试指标
当原材料、生产工艺等发生变化可能影响产品毒性时，应按表A1根据不同产品种类提供有效的（经政府认定的第三方）成品毒力学测试报告。
表A1
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产品种类
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皮肤刺激试验
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阴道粘膜刺激试验
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皮肤变态反应试验
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手套或指套、内裤
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√
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√
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抗菌（或抑菌）液体产品
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√
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根据用途选择1）
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√
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湿巾、卫生湿巾
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√
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根据用途选择1）
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根据材料选择
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口罩
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√
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妇女经期卫生用品
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√
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√
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尿布等排泄物卫生用品
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√
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√
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避孕套
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√
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√
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1）用于引导粘膜的产品须做引导粘膜刺激试验，但无须做皮肤刺激试验。
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A2 试验方法
皮肤刺激试验。根据卫生部《消毒技术规范》（第三版）第一卷《实验技术规范》（1999）中消毒剂毒理学实验技术中相应的试验方法，引导粘膜刺激试验和皮肤变态反应试验方法。
A3采用固体产品样品制备方法。
注
1.皮肤刺激试验中使用的空白对为：生理盐水和斑贴纸。
2.在皮肤变态反应中，用于致敏和刺激治疗的剂量保持一致。
A3样品制备。
A3.1皮肤刺激试验和皮肤变态反应试验。
横断切割一贴大小的产品。对于尿布等干性产品，女性月经卫生用品，用生理盐水润湿，贴在皮肤上，然后用斑贴纸覆盖。
A3.2引导粘膜刺激试验。
A3.2.1干产品(如女性经期卫生用品)
将足够的产品水平切割，按1g/10ml的比例加入灭菌生理盐水，密封在提取容器中，搅拌后放置在37℃±1℃下24小时。冷却到室温，搅拌后分析样液，以备检查。
A3.2.2湿产品(如卫生湿巾)
阴道粘膜刺激试验当天，将湿巾中的添加剂挤出作样品。
A4判断标准。
以卫生部《消毒技术规范》(第三版)第一卷《试验技术规范》(1999)中毒理学试验结果最终判断的相应部分作为试验结果判断原则。
附录B
（标准的附录）
产品微生物检测方法
B1产品采集及样品处理。
在同一批号的三个运输包装中，至少提取12个最小销售包装样品，1/4样品用于检测，1/4样品用于保留样品，1/2样品(可就地封存)必要时用于复检。抽样的最小销售包装不得破裂，检验前不得打开。
在100级净化条件下，用无菌方法打开至少3个用于检测的包装，从每个包装中取样，准确称10g±1g样品。切割后加入200ml杀菌生理盐水，充分混合，得到生理盐水样液。液体产品直接用原液制成样液。
如果被检样品含有大量的吸水树脂材料，导致不能吸出足够的样液，稀释液的量可以每次增加50毫升，直到足够的试验样液被吸出。在计算细菌菌落总数和真菌菌落总数时，调整稀释度。
B2细菌菌落总数及初始污染菌检测方法。
本方法适用于检测产品初始污染菌和细菌菌落总数（以下简称细菌菌落总数）。
B2.1操作步骤。
上述生理盐水样液自然沉降后，取清液进行菌落计数。共接种5个平盘，每个平盘加入1ml样液，然后将冷却至45℃左右的融化营养琼脂培养基15-20ml倒入每个平盘中，搅拌均匀。琼脂凝固后，将平盘翻转35℃±2℃48小时，计算平板上的菌落数。
B2.2结果报告。
不宜使用菌落片状生长的平板电脑；根据类型（B1）计算符合要求的平板电脑上的菌落：
类型：X1-细菌菌落总数，cfu/g或cfu/ml；
A-5块琼脂培养基本版细菌菌落总数；
K-稀释度。
当菌落数在100以内时，根据实数报告，超过100时才有两位有效数。
样品菌落总数超过本标准的，按B2.3进行复检和结果报告。
B2.3复检方法。
保留的复检样品依照前法复检两次，两次结果平均值符合本标准规定的，确定被检样品合格；一次结果平均值超过本标准规定的，判定被检样品不合格。
B3大肠菌群检测方法。
B3.1操作步骤。
取样液为5ml，接种50ml乳糖胆盐发酵管，35℃±2℃培养24h。如果没有酸或气，则报告为大肠菌群阴性。
如果产生酸性气体，则标记伊红美蓝琼脂平板电脑，在35℃±2℃培养18-24小时，观察平板电脑上的菌落形态。典型的大肠菌落为黑紫色或红紫色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽，有些为紫黑色，无金属光泽，或粉红色，中心较深的菌落。
取1-2个疑似菌落进行革兰氏染色镜检，同时接种乳糖发酵管，35℃±2℃培养24小时，观察产气情况。
B3.2结果报告。
所有乳糖胆盐发酵管产生酸气，乳糖发酵管产生酸气，伊红美蓝平板上有典型的大肠菌落，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，可报告检测样品检测大肠杆菌。
B4绿脓杆菌检测方法。
B4.1操作步骤。
取样液为5ml，加入50mlscdlp培养液，充分混合，35℃±2℃培养18-24小时。如果绿脓杆菌生长，培养液表面有一层细菌膜，培养液通常为黄绿色或蓝绿色。从培养液的细菌膜中挑选培养物，接种十六烷三甲基溴化铵琼脂平板，35℃±2℃培养18-24小时，观察菌落特征。绿脓杆菌在培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整齐，菌落周围培养基略粉红色，其他细菌不长。
革兰氏染色采用可疑菌落涂片，革兰氏阴性菌应进行以下试验。
氧化酶试验:取一小块干净的白色滤纸放入灭菌平皿中，用无菌玻璃棒挑选可疑菌落涂抹在滤纸上，然后滴一滴新制备的1%二甲基对苯二胺试液，30秒内出现粉红色或紫红色，氧化酶试验呈阳性，不变色者呈阴性。
绿脓菌素试验：取2-3个可疑菌落，用培养基斜面接种绿脓菌素测定，35℃±2℃培养24小时，加入3-5ml三氯甲烷，充分振荡，溶解培养物中可能存在的绿脓菌素。当三氯甲烷呈蓝色时，用吸管移动到另一个试管中，加入1mol/l盐酸1ml，振荡后静置片刻。如果上层有粉红色或紫红色，则为阳性，表示有绿脓菌素。
附录C
（标准的附录）
产品杀菌性能、抑菌性能与稳定性测试方法
C1样品采集。
为了使样品具有良好的代表性，应在同一批三个运输包装中随机抽取至少20个销售包装样品，其中5个样品，5个进行抗菌或杀菌性能测试，10个进行稳定性测试。
C2实验菌和菌液制备。
C2.1试验菌。
C2.1.1细菌：金黄色葡萄球菌（ATCC6538），大肠杆菌（8099或ATCC25922）。
C2.1.2酵母：白色念珠菌（ATCC10231）
菌液制备:取第3-14代营养琼脂培养基斜面新鲜培养物(18-24h)，用5ml0.03mol/L磷酸盐缓冲液(以下简称PBS)洗去菌苔，用上述PBS稀释至所需浓度。
C3杀菌性能试验方法。
根据被试产品生产者的说明确定试验取样部位。
C3.1中和剂鉴定试验。
杀菌性能试验必须通过以下中和剂鉴定试验。
C3.1.1试验分组。
1)5mLPBS染菌样品。
2)染菌样片5ml中和剂。
3)染菌对照片5ml中和剂。
4)5ml中和剂染菌对照片。
5)染菌对照片5mLPBS。
6)同批PBS。
7)同批次中和剂。
8)同批次培养基。
C3.1.2评价规定。
1)第一组无试验菌，或只有少数试验菌落生长。
2)第二组比第一组多，但比第3.4.5组少，符合要求。
3)第3.4.5组有相似量的试验菌生长，在1*104-9*104cfu/片之间，其组间菌落数误差率不应超过15%。
4)第6-8组无菌生长。
5)连续三次试验取得合格评价。
C3.2杀菌试验。
C3.2.1操作步骤。
用PBS冲洗试验菌24h斜面培养物，制成菌悬液(所需浓度为:将100ul滴在对照样品上，回收菌数为1*104-9*104cfu/片)。
取样（2.0cm*3.0cm）和对照样（与样品同质，尺寸相同，但不含抗菌材料，经灭菌处理），分为4组，放置在4个灭菌平板中。
取上述细菌悬浮液，分别在每张样品和对照样品上滴100ul，均匀涂抹，开始计时，作用2.5.10.20min，用无菌镊子将样品放入含有5ml相应中和剂的试管中，充分混合，适当稀释，然后取2-3个稀释度，分别吸收0.5ml，放置在两个平坦的容器中，冷却至40-45℃的营养琼脂培养基（细菌）或沙琼脂培养基（酵母）15ml，转动平坦容器，使其完全均匀，琼脂凝固后转动平板，35℃±2℃培养48h（细菌）或72h（酵母），进行活菌菌落计数。
实验重复三次，按类型(C1)计算杀菌率:
(A-B)/A*100%(C1)
公式：X3-杀菌率，%；
A-对照样品的平均菌落数；
B-使样品平均菌落数。
C3.2.2评价标准。
产品具有杀菌作用。
C4溶出性抗(抑)菌产品抗菌性能试验方法。
C4.1操作步骤。
用PBS冲洗试验菌24h斜面培养物，制成菌悬液（所需浓度为：将100ul滴入对照样品或5ml样液中，回收菌数为1*104-9*104cfu/片或ml）。
取样品（2.0cm*3.0cm）或样品（5ml）和对照样品或样品（尺寸相同，但不含抗菌材料，经灭菌处理）。
取上述细菌悬浮液，分别在每个试样或样液和对照样品或样液上或内滴100ul，均匀涂抹/混合，开始计时，作用2.5.10.20min，用无菌镊子将样品或样液(0.5ml)放入含5mlPBS的试管中，充分混合，适当稀释，然后取2-3个稀释度，分别吸收0.5ml，放入两个平皿中，用冷至40-45℃的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(酵母)15ml倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃±2℃培养48h(细菌)或72h(酵母)，做活菌菌落计数。
实验重复三次，按型(C2)计算抑菌率。
(A-B)/A*100(C2)
公式：X4-抑菌率，%；
A-对照样品的平均菌落数；
B-被试样品的平均菌落数。
C4.2评价标准。
产品具有抑菌作用，抑菌率≥90%，产品具有较强的抑菌作用。
C5非溶出性抗抑）菌产品抗菌性能试验方法。
C5.1操作步骤。
0.75g分装包试样片（切成1.0cm*1.0cm大小）。
将0.75g重样放入250ml三角烧瓶中，分别加入70mlPBS和5ml菌悬液，使菌悬液在PBS中的浓度为1*104-9*104cfu/ml。
将三角烧瓶固定在振荡摇床上，用300r/min振荡1h。
取0.5ml摇动样液，或用PBS稀释样液，用琼脂倾注法接种平皿，进行菌落计数。
同时，设置对照样品组和无样品组。对照样品组的对照样品大小与被试样品相同，但不含抗菌成分。其他操作程序与被试样品组相同。无样品组，取5ml菌悬液和70mlPBS，加入250ml三角烧瓶，混合均匀，分别在0时间和振荡1小时后，取0.5ml菌悬液和PBS混合进行适当稀释，然后进行菌落计数。
抑菌率按类型(C3)计算：
(A)
公式：X5-抑菌率，%；
A-被试样品振荡前的平均菌落数；
B-被试样品振荡后的平均菌落数。
C5.2评价标准。
C6稳定性测试方法。
C6.1测试条件。
C6.1.1自然留样：原包装样品在室温下至少1年，每半年进行抑菌或杀菌性能测试。
C6.1.2加速试验:将原包装样品放入54-57℃恒温箱14天或37-40℃恒温箱3个月，保持相对湿度>75%，进行抑菌或杀菌性能试验。
C6.2评价标准。
产品自然留样后，其杀菌率或抑菌率达到附录C3或附录C4。附录C5中规定的标准值，产品在室温下的杀菌或抑菌保持时间为自然留样时间。
经过54℃加速试验，产品的杀菌率或抑菌率达到附录C3或附录C4中规定的标准值，产品的杀菌或抑菌效果在室温下至少保持一年。
经37℃加速试验，产品的杀菌率或抑菌率达到附录C3或附录C4中规定的标准值，产品的杀菌或抑菌效果在室温下至少保持两年。
附录D
（标准的附录）
产品环氧乙烷残留量测试方法
D1测试目的。
确定产品消毒后的使用时间。当新产品或原材料的变化可能影响产品的理化性能时，应进行测试。
D2样品采集。
环氧乙烷消毒后，立即从统一消毒批号的三个大包装中随机抽取一定量的小包装样品。取样量至少应满足规定的测量次数（必要时留一定量进行复测）。
环氧乙烷消毒后24小时及以后每隔几天测量残留量，直至残留量降至本标准4.6规定的标准值以下。
D3仪器及操作条件。
仪器:气相色谱仪、氢焰检测器(FID)
柱：Chorosorb101HP60-80目；玻璃柱长2m，φ3nm。柱温：120℃。
探测器：150℃。
气化器：150℃。
载气量：氮气：35ml/min。
氢气：35ml/min。
空气：350ml/min。
柱前压约为108kPa。
D4.1标准配制。
用100毫升玻璃注射器从纯环氧乙烷小瓶中提取环氧乙烷标准气体（反复排空二次，排除原空气），塞上橡胶头，用10毫升注射器提取述100毫升注射器中提取10毫升纯环氧乙烷标准气体，用氮气稀释至100毫升（10毫升标准气体可注入90毫升氮气带橡胶塞头的注射器）。用同样的方法稀释2-3次（稀释1000-10000倍），作为三种浓度的标准气体。根据环氧乙烷小瓶中环氧乙烷的纯度、稀释倍数和室温计算最终标准气体中的环氧乙烷浓度。
计算公式如下：
公式：C-标准气体浓度，ug/ml；
k-稀释倍数；
T-室温，℃。
D4.2样品处理。
至少取2个最小包装产品，切碎，随机准确称2g，放入提取容器中，加入5ml去离子水，充分摇匀，放置4小时或振荡30min备用。如果被检样品为吸水树脂材料产品，部门应适当增加去离子水量，以确保至少能吸收2ml样品。
D4.3分析。
仪器稳定后，在同等条件下，环氧乙烷标准气体进样1.0ml，分析样品（水溶液）进样2ul，每种液体平行测量两次。
根据保留时间定性，根据峰面积(或峰高)进行定量计算，取平均值。
D4.4计算。
环氧乙烷工作曲线采用进入环氧乙烷标准气体的微克(ug)数。
根据样品中环氧乙烷对应的峰面积(或峰高)，在工作曲线上获得环氧乙烷的量A(ug)，并以类型(D2)获得产品中环氧乙烷的残留量。
公式：X-产品环氧乙烷残留，ug/g；
A-从工作曲线中检测到的环氧乙烷量，ug；
M-所取样品量，g；
V(萃)-萃取液体积，ml；
V(进)-进样量，ml。
附录E
（标准的附录）
生产环境采样与测试方法
E1空气采样及试验方法。
E1.1样品采集。
动态进行。
室内面积不超过30m2，内外三点，内外点距墙1m；室内面积超过30m2，东、西、南、北、中5点，周围4点距墙1m。
取样时，将含有营养琼脂培养基的平板(直径9cm)放置取样点(约桌面高度)，打开平板盖，使平板在空气中暴露5min。
E1.2细菌培养。
取样前，将准备好的营养琼脂培养基35℃±2℃培养24h，取出检查是否有污染，将污染培养基去除。
将采集的培养基在6h内送到实验室，在35℃±2℃培养48h观察结果，计算平板上的细菌落数。
E1.3菌落计算。
类型：y1-空气中细菌菌落总数，cfu/m3；
A-平板上平均细菌菌落数；
S1-平板面积，cm2；
t-暴露时间，min。
E2工作台表面和工人手表面采样测试方法。
E2.1样品采集。
工作台：将灭菌内径为5cm*5cm的灭菌规格板放在被检物体表面，用浸泡在灭菌生理盐水中的棉签涂抹10次，然后接触部分棉棒剪掉，将棉签放入含有10ml灭菌生理盐水的取样管中进行检查。
E2.2细菌菌落总数检测。
将收集的样品在6小时内送到实验室。每根取样管充分混合后，取1ml样液，放入灭菌容器中，倾注营养琼脂培养基。每个样品平行接种两个容器，35℃±2℃培养48小时观察结果，计算平板上细菌的数量。
类型：y2-工作台表面细菌菌落总数，cfu/cm2；
A-平板上平均细菌菌落数；
S2-采样面积，cm2；
y3-工人手表面细菌菌落总数，cfu/手。
E2.3致病菌检测。
消毒效果生物监测评价方法。
F1环氧乙烷消毒。
F1.1环氧乙烷消毒效果评价用生物指示菌为枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC9372)。在菌量为5*105-5*106cfu/片，环氧乙烷浓度为600mg/L±30mg/L，作用温度为54℃±2℃，相对湿度为60%±10%，其杀灭90%微生物所需时间D值为2.5-5.8min，存活时间≥7.5min，杀灭时间≤58min。
F1.2每次测试至少放置10个生物指示剂，放在最难杀死的地方。消毒后，取出指示菌片接种鹰眼肉汤培养液进行定性检测或接种营养琼脂培养基进行定量检测，对未处理的阳性对照菌片进行相同接种，均在35℃±2℃培养。阳性对照应在24小时内生长。如果定性培养样品连续观察7天无菌生长，可报告生物指示剂培养阴性，消毒合格。与阳性对照相比，定量培养样品的灭活指数达到103，也可报告消毒合格。
F2电离辐射消毒。
F2.1电离辐射消毒效果评价用生物指示菌为短杆菌芽胞E601(ATCC27142)，当菌量为5*105-5*106cfu/片时，杀灭90%微生物所需的D10值应为1.7kgy。
F2.2每次测试至少选择5箱，每箱产品放置3个生物指示剂，放置最小剂量。消毒后，取出指示菌片接种营养肉汤培养液进行定性检测或接种营养琼脂培养基进行定量检测，未处理阳性对照菌片进行相同接种，均放置35℃±2℃。阳性对照应在24小时内生长。如果定性培养样品连续观察7天无菌生长，可报告生物指示剂培养阴性，消毒合格。与阳性对照相比，定量培养样品灭活指数达到103，也可报告消毒合格。
F3压力蒸汽消毒。
按照GB15981-1995的规定执行。
附录G
（标准的附录）
培养基与实际制备
G1 营养琼脂培养基
成分：
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15g-20g
蒸馏水 1000mL
制法：除琼脂外其他成分溶解于蒸馏水中，调pH至7.2-7.4，加入琼脂，加热溶解，分装试管，121℃灭菌15min后备用。
G2 乳糖胆盐发酵管
成分：
蛋白胨 20g
猪胆盐（或牛、羊胆盐） 5g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 加至1000mL
制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH至7.4，加入指示剂，分装没管50mL，并放入一个小倒管，115℃灭菌15min，即得。
G3 乳糖发酵管
成分：
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 加至1000mL
制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH至7.4，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115℃灭菌15min，即得。
G4 伊红美蓝琼脂（EMB）
成分：
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2%伊红Y溶液 20mL
0.65%美蓝溶液 10mL
蒸馏水 加至1000mL
制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH至7.1，分装与烧瓶内，121℃灭菌15min备用，临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至55℃，加入伊红和美蓝溶液摇匀，倾注平板。
G5 SCDLP 液体培养基
成分：
酪蛋白胨 17 g
大豆蛋白胨 3 g
氯化钠 5 g
磷酸氢二钾 2.5 g
葡萄糖 2.5 g
卵磷脂 1 g
吐温80 7 g
蒸馏水 1000 mL
制法：将各种成分混合(如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替)，加热溶解，调pH至7.2～7.3，分装，121℃灭菌20min，摇匀，避免吐温80沉于底部，冷至25℃后使用。
G6 十六烷三甲基溴化铵培养基
成分：
牛肉膏 3 g
蛋白胨 10 g
氯化钠 5 g
十六烷三甲基溴铵 0.3 g
琼脂 20 g
蒸馏水 1000 mL
制法：除琼脂外，上述各成分混合加热溶解，调pH至7.4～7.6，然后加入琼脂，115℃灭菌20 min，冷至55℃左右倾注平皿。
G7 绿脓菌素测定用培养基斜面
成分：
蛋白胨 20 g
氯化镁 1.4 g
硫酸钾 10 g
琼脂 18 g
甘油(化学纯) 10g
蒸馏水 加至1 000 mL
制法：将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.4，加入琼脂和甘油，加热溶解，分装试管，115℃灭菌20 min，制成斜面备用。G8 明胶培养基
成分：
牛肉膏 3 g
蛋白胨 5 g
明胶 120 g
蒸馏水 1 000 mL
制法：各成分加入蒸馏水中浸泡20 min，加热搅拌溶解，调pH至7.4，5 mL分装试管中，115℃ 灭菌20 min，直立制成高层备用。
G9 硝酸盐蛋白胨水培养基
成分：
蛋白胨 10 g
酵母浸膏 3 g
硝酸钾 2 g
亚硝酸钠 0.5 g
蒸馏水 1000 mL
制法：将蛋白胨与酵母浸膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.2，煮沸过滤后补足液量，加入硝酸钾和亚硝酸钠溶解均匀，分装到有小倒管的试管中，115℃灭菌20 min备用。
G10 血琼脂培养基
成分：
营养琼脂 100 mL
脱纤维羊血(或兔血) 10 mL
制法：将灭菌后的营养琼脂加热溶化，凉至55℃左右，用无菌方法将10 mL脱纤维血加入后摇匀，倾注平皿置冰箱备用。
G11 甘露醇发酵培养基
成分：
蛋白胨 10 g
牛肉膏 5 g
氯化钠 5 g
甘露醇 10 g
0.2％溴麝香草酚蓝溶液 12 mL
蒸馏水 1000 mL
制法：将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.4，加入甘露醇和溴麝香草酚蓝混匀后，分装试管，115℃灭菌20 min备用。
G12 葡萄糖肉汤
成分：
蛋白胨 10 g
牛肉膏 5 g
氯化钠 5 g
葡萄糖 10 g
蒸馏水 1000 mL
制法：上述成分溶于蒸馏水中，调pH至7.2～7.4，加热溶解，分装试管，121℃灭菌15min后备用。
G13 兔血浆
制法：取灭菌3.8％柠檬酸钠1份，兔全血4份，混匀静置，3 000 r/min离心5 min，取上清，弃血球。
G14 沙氏琼脂培养基
蛋白胨 10 g
葡萄糖 40g
琼脂 20g
蒸馏水 1000 mL
用700 mL蒸馏水将琼脂溶解，300 mL蒸馏水将葡萄糖与蛋白胨溶解，混合上述两部分，摇匀后分装，115℃灭菌15 min，即得。使用前，用过滤除菌方法加入0.1g/L的氯霉素或者0.03g/L的链霉素。
定性试验采用沙氏培养液，即除不加琼脂外其他成分与制法同上。
G15 营养肉汤培养液
蛋白胨 10 g
氯化钠 5 g
牛肉膏 3 g
蒸馏水 1000 mL
调节pH使灭菌后为7.2～7.4，分装，115℃灭菌30 min，即得。
G16 溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基
蛋白胨 10 g
葡萄糖 5g
蒸馏水 1000 mL
调节pH至7.0～7.2，加2％溴甲酚紫酒精溶液0.6 mL，115℃ 灭菌30 min，即得。
G17 革兰氏染色液
结晶紫染色液：
结晶紫 1 g
95％乙醇 20 mL
1％草酸铵水溶液 80 mL
将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
革兰氏碘液：
结晶紫 1 g
碘 1 g
碘化钾 2 g
蒸馏水 300 mL
脱色剂
95％乙醇
复染液：
(1)沙黄复染液：
沙黄 0.25 g
95％乙醇 10 mL
蒸馏水 90 mL
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
(2)稀石炭酸复红液
称取碱性复红10g，研细，加95％乙醇100mL，放置过夜，滤纸过滤。取该液10mL，加5％石炭酸水溶液90mL混合，即为石炭酸复红液。再取此液10mL，加水90mL，即为稀石炭酸复红液。
G18 0.03 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.2）
成分：
磷酸氢二钠 2.83 g
磷酸二氢钾 1.36 g
蒸馏水 1000 mL
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