洁净室中浮游菌的检测标准和检测方法

1局限性

本限度划分了医药业无菌室和洁净区中浮游菌的检测标准和检测方法。

本限度适用医药业无菌室和洁净区，无菌室或部分空气过滤地区（包含清洁事儿台）的浮游菌的测验和条件的认证。

2引入限度：GB/T16293.2010

药物生产制造整治标准（1998修定）附则。

洁净度等级

4检测方法

4.1方法摘要

本标本采集接受的形式是记数浓度值法。即根据互联网悬游在空气中的潜在性颗粒于专业的培养基（挑选 能印证其可以适用微生物菌种生长发育的培养基），经多个時间和适宜的生长发育标准下让其滋长到由此可见菌落计数，以分辨该洁室的细菌浓度值。

4.2员工的主要职责及学习培训

GMP无菌洁净车间的检测员工应举办本专业的专业培训并得到相应的条件后才气才气实行对无菌室检测的岗位职责，在其中包含涉及到的卫生保健知识和基础的微生物菌种专业知识。

无菌室的检测员工应挑选 与生产制造实际操作的气体洁净度等级规定相切合的衣着方法，外边的衣服裤子不可以带到100000级以上的地区。

4.3仪器设备、防具和培养基

挑选 适宜的浮游菌采样器，包含接受隔膜真空泵的抽气泵，较低的气旋流动速度和很大的取样总流量，以确保培养基外边的水漫衍被烘干。

本检测必须具有仪器设备、防具和培养基如下所示：

a)浮游菌采样器；

b)培养皿；

c)髙压消毒锅；

d)培养基；

e)控温培养箱；

4.4浮游菌采样器基本原理

浮游菌采样器一样通常接受碰撞法原理，可分成缝隙式采样器、离心式风机或针眼式采样器。缝隙式采样器由内部结构离心风机将气旋吸进，根据采样器的缝隙式平板电脑，将收集气体喷出并撞到迟缓的平板电脑培养基外边，粘附的活微生物菌种颗粒经培养后产生菌体。

4.5检测关键点

4.5.1务必依据设备的计量检定周期时间，按时对测试设备作计量检定。应应用计量检定及格，并且应用有效期限内的仪器设备。

4.5.2测试设备未进到被测地区时，若务必，则先清洗外边吧，或在回应的无菌室内提前准备和储放（用爱惜罩或别的适度地罩壳爱惜仪器设备）。

4.5.3在100级无菌室内拿纸时，上边应蒙上一张全透明不沾尘的包裹在物，在100级的无菌室内不能用签字笔的橡皮擦。

4.5.4应用测试设备时要严苛根听使用说明实际操作。

4.5.4.1仪器设备启动，加热到牢固后，即可按使用说明书的划分对仪器设备举办校准，与此同时查验取样总流量，并凭据取样量设准時间。

4.5.4.2取样口需要用应用有利于消毒杀菌及有机化学特性牢固的材料生产制造。

4.5.4.3取样管禁止漏水，内腔应滑润。

4.5.4.4取样管的尺寸应凭据测量点的相对高度定，只要减少弯折。

4.6培养皿

4.6.1一样通常接受φ90mm×15mm规格型号的培养皿。可凭据所采用采样器挑选 适宜的培养皿。

4.6.2离心式风机采样器接受专用型的固型培养条

4.7培养基

黄豆酪胚盘琼脂培养基（TSA）或沙氏培育基（SDA）或别的用户认同并简历证的培养基。

4.8控温培养箱

务必按时对控温培养箱举办验证

4.9测试流程；

4.9.1检测前仪器设备、培养皿外边务必严苛消毒杀菌。

4.9.1.1采样器进到被测屋子前先用消毒房间的消毒液杀菌，用以100级无菌室的采样器

宜事先放到被测屋子里。

4.9.1.2用消毒液擦干净培养皿的外外边。

4.9.1.3取样前，先用消毒液消毒杀菌采样器的机盖、轮盘及其外罩的内外边，取样竣事，再用消毒液轻轻地喷出外罩的内部和轮盘。

4.9.1.4取样口及采样管，应用前务必高温灭菌。如用消毒液对取样管的外墙及内腔举办消毒杀菌时，应将管内的残余液扔掉并晾晒。

4.9.1.5取样者应衣着与被测清洁地区回应的事儿服，在轮盘上放进或获得培养皿前，两手用消毒液消毒杀菌或带无菌手套实际操作。

4.9.1.6取样仪器设备经消毒杀菌后先不放进培养皿，打开浮游菌采样器，使仪器设备中的残留消毒液挥发，時间不少于5min，并查验总流量并凭据取样量调节设准時间。

4.9.1.7关掉蜉蝣采样器，放进培养皿，盖紧外盖。

4.9.1.8置取样口于采样点后，打开浮游菌采样器举办取样。

4.10培养

4.10.1全部取样竣事后，将培养皿倒放置控温培养箱中培育。

4.10.2接受黄豆酪胚盘琼脂培养基（TSA）配置的培养经取样后，在30℃～35℃培养箱中培育，時间不能小于2d；接受沙氏培养基(SDA)配置的培养皿经取样后，在20℃～25℃培养箱中培育，時间不少于5d。

4.10.3每次培养基应该有对比实验，磨炼培养基自身是不是环境污染。可每次选中3只培养皿作对比培养。

4.11菌落计数

4.11.1用眼睛对培养皿上任何的菌体立即记数、标记或在菌落计数器上点计，随后用5～10倍高倍放大镜查验，有无忽略。

4.11.2若平板电脑上面有2个或2个以上的菌体重合，可辩解时仍以2个或2个以上菌落计数。

4.12重视事宜

4.12.1应用前要认真仔细每一个培养皿品质，培养基及培育皿有质变、损坏或环境污染的不能用应用的。

4.12.2对培养基、培育标准以及他主要参数作详尽记录。

4.12.3因为病菌品种繁多，差别甚大，记数时一样平时用电子散射光于培养皿面或真面细心调查，不必有忽略计培养皿边沿生长发育的菌体，并需要菌菌体或培养基沉积的物差别，必须时要高倍显微镜辨别。

5检测标准

5.1检测标准

在检测前要，要对无洁净室有关主要参数举办事先检测，这类测试可能给予检测飘浮颗粒的自然环境标准，例如：这类事先检测或可包含：

a)溫度和空气湿度的检测。无菌室的溫度和空气湿度应与其说生产制造及加工工艺规定相适

应（无特别要求时，温控在18℃～26℃，空气湿度操纵在45%～65%中间为宜）。与此同时满

足测试设备的应用局限性；

b)房间内送排风量或风力的测验的检测，或压力差的检测；

c)高效送风口的泄漏检测

5.2测试状态

静态数据和信息二种情况均可举办检测。

静态数据检测时，房间内检测员工不可超过2人

浮游菌检测前,被测量无菌室(区)由客户决定是不是必须事先消毒杀菌.

浮游菌检测时要标出检测时需接受的情况和房间内检测员工数。

5.3检测時间

5.3.1在空态或静态数据a检测时，对单边流无菌室来讲，检测宜在净化室内空气调理系统软件正常的运转時间不少于10min后最开始。对非单方面流无菌室，检测宜在净化设备正常的运转時间不少于30min后最开始。在静态数据b检测时，对单边流清洁是（区），检测宜在生产加工实际操作员工撤出当场并经过10min臭氧消毒后最开始；；对非单边无菌室，检测宜在生产加工实际操作员工撤出当场并经过20min臭氧消毒后最开始。

5.3.2在动态性检测时，则须记录生产制造最开始的時间及其检测時间。

5.4.浮游菌浓度值的筹算

5.4.1取样点数量以及布署

5.4.1.1至少取样点数量

浮游菌的取样点部位可参考GB/T16292-2010

a）事儿区测量点部位距地0.8～1.5m上下（稍高于事人情世故）。

b）正压送风口测量点部位摆脱排风面30cm上下。

c）可在重要武器装备或重要事儿流动性局限性处增加测量点。

5.4.2最少取样量

浮游菌每一次最少取样量见表1。

表1最少取样量

5.4.3取样频次

每一个取样点一样平时取样一次。

5.4.4取样重视事宜

5.4.4.1针对单边流无菌室或正压送风口，采样器取样口朝应正对着气旋偏重；针对非单方面流无菌室，取样口往上。

5.4.4.2布署取样点时，最少应只要绕开细颗粒物较密集的回风管道。

5.4.4.3取样时，检测员工应立在取样口的低处侧，并只要少行走。

5.4.4.4接受一切对策避免取样过程的环境污染和其它很有可能对样版的环境污染。

5.4.4.5培养皿在用以查验时，为阻拦培养皿运送或挪动过程导致的危害，宜与此同时举办阴性对照实验，每一次或各个地区取1个对比皿，与取样皿同法实际操作但不可外露取样皿，随后与采集后的培养皿（TSA或SDA）一起放进培养箱里培养，实际效果应无菌检测落生长发育。

5.5记录

检测叙述中应包含以下几点

a)被试者的命名和详细地址，检测日期；

b)检测根据

c)试无菌室的水平部位（必须时标明邻近地区平面图部位）；

d)相关测试设备以及检测方法的外貌：包含接口测试标准，取样点数量及部署图，检测频次，取样总流量，或很有可能具有的检测方法的获得，测试设备的计量检定资格证书等；若为动态性检测，则还应记录当场实际操作员工数量及部位，当场运行武器装备和数量和部位；

e)实际效果：包含全部统计分析筹算材料。

5.6实际效果筹算

5.6.1用记数方法得到每个培养皿的菌体数。

5.6.2每一个测量点的浮游菌均值浓度值的筹算，见式（1）。

均值浓度值（个/m3）=菌体数/取样量（1）

例1：某测量点取样量为400L，菌体数为1，则：

均值浓度值=1/0.4=2.5个/m3

例2：某测量点取样量为2m3，菌体数为3，则：

均值浓度值=3/2=1.5个/m3

5.7实际效果鉴定

5.7.1每一个测量点的浮游菌均值浓度值务必小于所选中的鉴定限度中有关病菌浓度值的界限。

5.7.2在静态数据检测时，若某测量点的浮游菌均值浓度值超越鉴定限度，则应再次取样2次，两次检测实际效果均及格才气判为相符合。

5.8一样平时监管

针对浮游菌的监管，宜设置纠偏装置程度和警示程度沿单一偏重呈平行面流线型并且与气旋偏重竖直的横断面优点速的气旋，以确保无菌室的细菌浓度值遭受操纵。应按时以查验微生物菌种负载及其消毒液的法律效力，并不是作趋向分析。静态数据和信息的监管都能够接受该方法。

针对浮游菌的采样頻率次，若是涌起以下情况应考虑应改动，在评定下列情况，也应明确别的项目的检验次数：

持续超越纠偏装置和警示程度；

歇工時间比预估拓宽；

生产制造时期，空气净化设备举办一切重要的检修；

常操做记录播映出共性的数据信息；

消毒杀菌技术规范的更改；

生物入侵等；

当生产制造武器装备有重要检修或增加武器装备时；

当无菌室构造地区漫衍有重要变更时。