化妆品GMP卫生规范2009版之微生物检验方法
范围
器和设备
玻璃珠。玻璃棒。刻度吸管，1ml。研碗或均质器。恒温水浴箱。
三、养基和试剂。
钠8.5g
到1000毫升。
103.43kpa℃15lb↑高压灭菌。液体培养基成分：酪蛋白17g大豆蛋白3g氯化钠5g磷酸氢二钾2.5g葡萄糖2.5g卵磷脂1g吐温807g蒸馏水1000ml。
103.43kPa℃15lb高压灭菌lb高压灭菌。注意振荡，充分混合沉淀在底部，冷却至25。
灭菌液石蜡。灭菌吐温80。
样品中的样品有表，一视批化学品数量大，机器抽样数量包装单元。检验时，应从两个以上包装单位的样品中提取10g或10ml。包装量小于20g的样品可适当增加样品包装量。
4.2检查时，严格持有装态器，应在前开裂，止样品被污染。
4.3样品应放在室温凉爽干燥的地方，不得冷藏或冷冻。
4.4只有样对样品进行更多的分析，如理学，先对样品进行细菌检测，然后对剩余样品进行其他分析。
4.5检验中使用的器皿和材料应提前灭菌，所有操作应在无菌室进行，或在相应条件下检测粪便大肠菌群或其他致病菌，自报告之日起保存一个月。
液体样品水溶性液体样品可取10ml灭菌生理盐水。如果样品少于10ml，则仍按10个灭菌生理盐水制成1检液。
5.1.2，先加5ml，在80℃~44浴中振荡混合10min(40℃~44，制成1悬液。
5.2亲水样品：取10g、振荡混匀、静置15min的疏水样品：取10g放入灭菌碗中，加10ml，加10ml，研磨溶解后，加70ml℃浴：10固体样品。
，在灭菌生理盐水中，充分振荡混合，使其分散悬挂，静置后，取：10如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉等，可称为10g↑均质1min；疏水霜、霜、眉笔、口红等，称为10g产品，加10ml灭菌液石蜡，
10ml，70ml~5min。
二、菌落总数。
本规范规定了化妆品中菌落总数的检测方法。
本规范采用以下定义。
)是指化妆品样品经过处理，在一定条件下培养后(如值、需氧性质等)，1g)的数量。结果仅包括本方法规定条件下一组嗜中温的需氧菌落总数。
在被子的卫价上定菌。
仪器三角瓶，250ml。
3.1.计或精确pH。
3.2.灭菌刻度吸管，10ml。酒精灯。恒温培养箱：36±1。放大镜。
3.3.养基和试剂。
3.4.卵磷脂，吐温80营养琼脂培养基。
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3.5
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牛肉膏
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3g
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琼脂 15g
吐温 80 7g 水 1000mL
4.2.2 ，将其他成分（除琼 ，值为 7.1，加入琼脂，103.43kPa℃ 15 lb高压灭菌，储存于冷暗处备用。
3.6 0.5，TTC成分：TTC 0.5g
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水 100mL
（121）20min ℃箱
5 步骤
5.1:10，分别注入两个灭菌容器，每个容器1ml注入9ml，混合均匀，制成1检。样品包括:1000:10000个吸管。
5.2化为45~50的磷脂吐营养琼培养基倒入平盘中，每盘约15ml，然后转动平盘，使样品与培养基充分混合均匀。琼脂凝固后，翻转平盘，在36±1内培养48小时。取另一个无样品的灭菌空盘，加入约15ml的营养琼脂培养基。琼脂凝固后，翻转平盘，在36±1培养箱中培养48小时。
5.3卵磷脂吐温80养琼脂中加入1ml0.5TTC。
六落计数法。
每个平皿的菌落数翻倍~10次后，找出每个平皿生长的相同稀释度的平均菌落数。如果平皿中的菌落数分布均匀，则这半平皿菌落数可乘以2。
7落计数及报告方法。
当7.1~300个稀释度的平均菌落数满足此范围时，即乘以稀释倍数（见表1），如果平均菌落数在30个之间，则应确定两个菌落总数的比例，并报告其平均数，如果大于2个菌落数（见表1和例3。
7.3倍数报告(见表1例4。
7.4个，稀释倍数应乘以稀释倍数5，稀释度最低。
7.5~300，个时，以近30平均菌落数乘以稀释倍数报告(见。
中例6。
7.6或每毫升在10CFU。
7.7以内，根据实际值报告，大于100、有效数字，两个有效数字背后的值按四舍五入法计算。为缩短数字背后的零数，指数表示(见表1稀释。
范围 本规范适用于化妆品中粪大肠菌群的检验。
定义粪大肠菌群(Fecalcoliforms一群需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞菌，
这种细菌在44.5培~48小时内直接来自粪便，是一种重要的卫生指示菌。
仪器恒温水浴箱或隔水恒温箱:44±0.5。温度计。显微镜。带玻片。接种环。电磁炉。三角瓶，250ml。
3.8×150mm。
3.9
3.10pH或pH。
3.11
3.12.1ml。
4养基和试剂。
4.1成分：40g蛋白质。
乳糖10g
0.4紫液5ml吐温8014g水1000ml。
溶解在少量蒸馏水中。将蛋白质、胆盐和乳糖溶解到其余的7.4个试管中，加入0.4个小倒管)。68.95kPa℃10lb灭菌。
4.2）
乳糖10g
琼脂20g
20毫升溶液。
4.3 0.5美容溶解蒸馏方法：先将琼脂加入900ml蒸馏水中，加热溶解，再加入磷酸氢二钾蛋白蛋白，混合均匀。值~7.4分装入三角瓶中，103.43kPa。
℃15lb高压灭菌备用。临时加入乳糖，加热融化琼脂。冷至60左右，氯化钠为5g，无蛋白质水（靛蓝基质试验）。
水1000毫升。
值为7.0，（121）15min。
4.4对二甲氨基苯甲醛溶解在75ml。℃±0.5养24h。沿管壁加柯凡克。
~55ml注：蛋白质应富含色氨酸，每批蛋白质购买后，应先用已知菌种鉴定。
4.5染液制备结晶紫染色液：结紫1g。
95乙醇20毫升。
1草酸铵水溶液80ml。
4.5.1.2碘钾2g先将碘与碘化钾混合，加入少许蒸馏水，充分振动，待完全溶解后，再加入蒸馏水至300ml。
4.5.1.3%乙醇
黄0.25g。
将沙黄蒸解成乙醇，然后用蒸馏水稀释。
)，100毫升的%乙醇放置过夜，过滤，90毫升的%石碳酸水溶液加水90毫升是稀石碳酸复红液。
4.5.2
4.5.2.1，水洗。滴加革兰碘液，作用1min。
4.5.2.3加95，涂片，脱色10s滴加复染液，复染1min染色结果注：如用1:10。
取10ml1稀双倍乳糖胆盐(含中和剂)培养基，放置44。
℃培~48h。
5.2℃18小时。同时，在~2℃±2小时后，观察上述平板电脑上是否有典型的菌落生长。粪便大肠菌群基于伊红美蓝琼脂培养，无金属光泽，或粉紫色，中心深菌落，也常为粪便大肠菌群，应注意选择。
5.3在蛋白质水培养液中加入靛基质试剂约0.5ml红色；阴性反应液表面呈试剂本色。
6 检测结果报告验阳性，可报告被检样品中检测粪大肠菌群。
本规范规定了化妆品中铜绿假单胞菌的检测方法。定义铜假细菌)在假胞属、革氏阴杆、氧化℃条件下，对人有致病性，可使伤口化脓，引起败血症等。
仪器培养箱：42±1.36±1。三角瓶，250ml。
灭菌刻度吸管，10ml。显微镜。带玻片。接种针。接种环。电磁炉。高压灭菌器。
养基和试剂。
SCDLP见总则中3.26烷基三甲基溴化铵培养基。
10g十六烷基甲基溴化琼脂20g水1000ml。
加入琼脂，68.95kPa。
℃10lb灭灭。
胺10.0g钠5.0g氢钾1.39g。
二钾0.73g镁)0.5g红0.012g脂20g水1000毫升。
脂.酚红，103.43kPa℃15lb高压灭菌后，制成平板备用。
蛋白氯化硫酸琼甘油（纯蒸馏法：将蛋白质、氯化镁、硫酸钾加入蒸馏水中，加热溶解，调节pH，加入（115）20分钟高压灭菌。
明胶培养基成分牛肉蛋白明蒸馏法:将各种成分加入蒸馏水中浸泡20min，随时搅拌加热溶解，调节pH，安装(115)20min菌，直立制成高层备用。
蛋白酵母膏3g钾2g钠0.5g水1000ml。
为7.2补充液量，加入硝酸钾和亚硝酸钠，溶解混合，分装在小倒管试管中，68.95kPa℃10lb灭菌后备用。
10g膏3g钠5g脂15g水1000ml。
解、分装试管，103.43kPa℃10lb高压灭菌后，制成斜面备用。
操增菌培养：取1:10加至90mlSCDLP℃~24h或蓝绿色。
离培从薄培养线63溴铵平开，36±1培养18小时。铜绿假单胞菌在此培养的基础上，其菌落扁平无定型，对周养基选择性强，大肠艾希氏菌无法生长，革兰氏阳性菌生长较差。
板上，36℃培养24小时，铜绿假单胞菌在此培养基础上生长良好，菌落扁平，边缘染色检测:疑似涂片革氏染色检测为兰阴性，应进行氧酶氧试验，取小块净白纸放入菌皿中，用菌玻棒取铜假%二甲基对苯二胺试液。
15s验阴性。
~3℃±1±2h~5ml内，氯仿提取物呈蓝色时，用吸管将氯仿移至另一根试管，加入约1mol/L，上盐酸液呈粉红色至紫红色时呈阳性，表示被检物中有绿脓硝还原气验：可疑绿单胞纯养物与硝盐水培基℃±2h相连，观察结果。硝酸盐水培养基内的小倒管中有气体的，采用明化试验，采用铜绿单菌可菌纯养，采用明培基内置℃℃养24h。如果~30min仍溶解或表面溶解，则采用明胶℃长试验：采用绿假胞纯培物接种普琼脂面养基，℃℃，~48h铜绿假单胞菌可生长，呈阳性，近似荧光假。
如果检测结果是报告性的，可以报告检测样品中检测到的铜绿假单胞菌；如果绿脓菌素试验呈阴性，液化明胶。当硝酸盐和℃生长试验呈阳性时，仍可报告检测样品中检测到的铜绿假单胞菌。
将金黄色葡萄球菌定义为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞。这种细菌是葡萄球菌中对人类致病性最强的一种，可引起人体局部化脓性病变，严重时可导致。
本规范适用于化妆品中金黄色葡萄球菌的检验。
3器和设备
液体培养基。
4.27.5蛋白牛肉氯化蒸馏水加工方法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，103.43kPa℃15lb高平板。
10g膏5g浸丙酮钠10g酸12g)5g。
脂20g
水950毫升。
pH7.0增菌剂的制备:30与灭菌过滤1混合，保存方法:将各种成分加入蒸馏水中，加热煮沸，完全溶解，冷至25℃校正pH瓶95ml(121)高度。加入℃，使用前在冰箱内储存不超过48h。
4.4成分：营养琼脱纤维羊血（或兔血）10ml。
℃左右无平板，放入冰箱备用。
4.5成分：蛋白质10g甘露醇10g麝香草蓝溶蒸馏法：将蛋白质、氯化钠、牛肉膏加入蒸馏水中，加热溶解，调节pH7.4，加入甘露醇和（115）20min兔（人）血浆。
%(121)30min加兔(人)全血4~3000rpm~5min。
操增菌：取1稀液体培养基，36±1培养24h。
%分离:从上述增菌培养液中，取1个接种环，在氏培养基上划线接种，如℃~48小时为金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在巴基斯坦，它是圆形的，光滑的，凸起的，湿润的，直径2毫米，灰色到黑色的颜色，浅色的边缘，类似的菌落溶解在周非脂肪，但没有浊带和透明带。选择单个菌落，将其分为血琼脂平板电脑和36个。
℃培养24小时。染检：取纯菌、片、行兰氏色镜检查金色葡萄球为革氏~。
1√m甘发酵加入~3mm℃±2h金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇血浆凝固酶试验：吸收1:4±2h。℃每半小时观察一次，6小时呈阳性，血浆凝阳性，菌株肉养分和培养。
0.5ml血浆0.5ml。
6.范适用于各种化妆品中霉菌和酵母的计数。
定义霉菌和酵母菌数量测定(Determinationofmoldsandyeastcount是指化妆品检样在一定条件或1ml及酵母菌污染程度及其一般卫生状况下。
72培养72h。
3器和设备
试管：15。平皿：直径9cm。
10ml。
酒精灯。高压灭菌器。
养基和试剂。
见总则中3.1虎红(孟加拉红)培养基。
10g硫酸镁(含7H2O琼脂20g)。1/3000水1000毫升。发霉方法：除虎红外，加入蒸馏溶解，然后加入虎溶液。分离后，103.43kPa℃15lb高压灭菌，少量乙醇溶解氯霉素，过滤溶解后加入30mg培加链霉素。
5作步骤
5.1见菌落总数测定中6.1取1.1.1分别注入灭菌平皿，每种稀释度各用2。
℃±1左右的虎红培养基应充分摇匀。固化后，翻转平板电脑，在℃下饲养72小时，计算平板电脑中生长的霉菌和酵母的数量。如果霉菌扩散生长，为避免±2小时计算方法：点击每个板生长霉菌和酵母的数量，每个释放的平菌~50为每g）样品中所含的霉菌和酵母的数量。其他范围内的菌落数报告应参照每g或每ml（ml）
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