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许多测试要求在无菌条件下进行.主要原因是:
防止检测出的病原菌因操作不当而造成个人污染.
1.无菌操作要求1.接种细菌时必须穿工作服，戴工作帽.
2.接种食品样品时，必须穿专用工作服、帽子和拖鞋，放在无菌室缓冲室，工作前用紫外线消毒使用.
3.接种食品样品时，进入无菌室前用肥皂洗手，用75%的酒精棉球擦手.
4.接种使用的吸管、平盘和培养基等必须消毒灭菌，打开未使用的盘子，放置后不能使用，金属器具必须用高压灭菌或95%的酒精燃烧3次后使用.
5.从包装中取出吸管时，吸管的尖端不得接触露出部位，使用吸管接触试管或平盘时，吸管的尖端不得接触试管或平盘的边缘.
6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后，打开试管塞必须用火焰消毒.
7.接种环和针在接种细菌前用火焰烧毁所有金属线，必要时烧毁环和针与棒的连接部，接种结核菌和烈性菌的接种环在沸水中煮沸5min，用火焰烧毁.8.吸管吸收菌液或样品时，应使用相应的橡胶头吸收，不得直接用口吸收.二.无菌之间的使用要求1.
无菌之间通向外部的窗户必须是双层玻璃，密封，无菌之间的大小不得随意打开缓冲间和拉门，设置0.5-0.7m2的小窗户，以备进入无菌之间传递物品.2.无菌之间应保持洁净，工作后用2%-3%的煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品.3.在无菌之间使用前后关闭门，打开紫外线灯室内悬挂紫外线灯消毒时，需要30W紫外线灯，距离1.0m，照射时间在30min以上，使用紫外线灯时，请注意不要直接在紫外线下操作，以免损伤4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意进出.如果需要传递物品，可以在窗户上传递.5.无菌之间需要设置空调时，需要过滤装置.
金属器具和培养基、污染和接种的培养物等，必须灭菌后使用.
干热和湿热高压蒸汽锅的灭菌方法
1、灭菌前准备好的
(1)所有需要灭菌的东西都要先洗干净，玻璃器具如吸管、平盘用纸包装严密，用金属筒打开上面的通气孔.
(2)安装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好，注射器抽出管芯，用纱布包好.2.放置(1)干热灭菌器:放置物品不能挤压，也不能接触箱子的四壁.
(2)大型高压蒸汽锅:放置灭菌物分别包裹，直接放入消毒筒内，物品之间不得挤压.3.设备检查(1)检查门开关是否灵活，橡胶圈是否损坏，是否平整.
(2)检查压力表蒸汽排出时是否停留在零位置，关闭门和盖子，蒸汽和加热后，观察空气是否泄漏，压力表和温度计表示的情况是否一致，管道是否堵塞.
(3)对于有自动电子程序控制装置的灭菌器，在使用前检查规定的程序，是否符合灭菌处理的要求.4.灭菌处理(1)干热灭菌法:该方法适用于干热时不破损、不变质、不蒸发的物品、玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等灭菌.
①器械容器清洗后干燥，以免附着在表面的污垢炭化.
②灭菌时放置物品不要挤压，不要直接接触底部和箱壁，物品之间留有间隙.
③菌时关闭箱门，接通电源，首先打开排气孔约30min，排除灭菌器中的冷空气，温度上升到160℃调节指示灯，维持1.5?2小时.④灭菌结束后或温度上升时，必须在60℃以下打开箱门.
2、手提式高压锅或立式压力蒸汽灭菌器的使用应按以下步骤进行:
①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L(重复使用时补充水量，水变混浊需要更换).
②手提式压力锅将顶盖的排气管插入消毒罐内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用).
③盖上盖子拧紧，不漏气的灭菌器放在火源上加热，立式压力锅通过电源，打开顶盖的排气阀放入冷气阀(水沸腾后排气阀10-15min)的灭菌器.
③盖子拧紧顶盖子，不漏气的灭气的灭气体压力，放入火源，立即取消除压力，立即取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力.
⑤取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力.
②夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸汽引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出.
③锅室达到规定的压力和温度时，调节吸气阀，保持恒定④自然或人工冷却到60℃后开门取物，不得使用快速排出蒸汽法，以免突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破.
⑤使用自动程序控制式压力蒸汽灭菌器，放置物品关闭门后，根据物品类别按下相应的开关，按要求自动灭菌，灭菌时必须使用附属仪表记录温度和时间，操作要求严格按照制造商的说明书进行.5.灭菌温度和时间(1)干热灭菌器灭菌温度为160℃，为1.5-2h.(2)压力蒸汽灭菌锅的灭菌温度和时间
(3)间歇性灭菌方法
1.灭菌方法
压力不大的蒸汽进行灭菌，有些物质通过高压蒸汽灭菌容易破坏，可以用这种方法灭菌.
(1)将想要灭菌的东西放入锅中，盖上盖子，打开排水口，排出器内的馀水.
(2)关闭排水口，打开进气门，必要时消毒10~20min.
(3)灭菌后关闭进气门，取出物品冷却到室温，放入37℃的温箱过夜，第二天用上述方法消毒，这样3次就能达到灭菌的目的.2.血清凝固器的使用方法:如果培养基中含有血清和蛋的特殊成分，高热会破坏营养成分，因此使用低温，可以使血清凝固，达到灭菌目的:(1)使用该法灭菌的血清等分装时，必须严格遵守无菌操作，试管、平盘也必须在灭菌后使用.
(2)根据要求将培养基变成斜面和上层，加入足够的水后，连接电源，升温75~90℃1h灭菌，放入37℃的温箱过夜，这样灭菌3次.3.沸腾消毒:用煮锅或沸腾消毒器，水沸腾后煮5~15次min，水中加入2%的煤酸煮5min，加入0.02%的甲醛，80℃煮60min达到灭菌目的，但在选择沸腾消毒的增加消剂时，必须注意对物品的腐蚀性.
4.灭菌处理:灭菌后的物品，根据正常情况无菌，从灭菌器中取出时，必须仔细检查放置，以免再次污染.
取出(1)物品，立即检查包装的完整性，破坏或棉塞脱落时，不得作为无菌物品使用.
(2)取出的物品，如果包装有明显的浸水者，不得作为无菌物品使用.
(3)培养基或试剂等，必须检查是否符合灭菌后的颜色或状态，未达到的人应废弃.
(4)启闭式容器，取出时应关闭筛孔.
(5)取出的物品掉落在地面或错误地面，不洁净的地面，不洁净的液体，不能作为无尘物品使用的情况下).
培养物等未经消毒处理，一律不得带出实验室.
1.培养的污染材料和废弃物应放置在严密的容器和铁丝筐中，集中保管在指定的场所，统一进行高压灭菌.
2、经过微生物污染的培养物，必须经过121℃、30min高压灭菌.
3.染菌后的吸管，使用后放入5%的煤酚肥皂溶液和石炭酸液中，至少浸泡24小时(消毒液不得低于浸泡高度)，经过121℃、30min高压灭菌.
4.涂层染色清洗层的液体，一般可直接冲入下水道，烈性菌的清洗液必须冲入杯子中，高压灭菌后倒入下水道，染色的玻璃层浸入5%煤酚皂溶液中24小时后煮沸清洗.
做凝聚试验用的玻璃或平盘，必须在高压灭菌后清洗.5.破碎的培养物，立即用5%的煤酚皂溶液或煤酸液喷洒和浸泡污染部位，浸泡30分钟后擦拭干净.污染的工作服和强烈试验穿的工作服、帽子、口罩等，必须放入专用的消毒袋中，用高压灭菌后才能洗.
由于各种微生物对营养的要求不完全相同，培养目的不同，各种培养基础的准备要求如下:
1.根据培养基础处方的成分量称，溶于蒸馏水，使用前应对应用的试剂药品进行质量检查.
2.pH测定和调节:pH测定必须在培养基冷到室温时进行.在热或冷的情况下，pH有一定的不同，所以测定的情况下，在计算量中加入碱或酸混合后，再进行测试.培养基pH值必须正确.否则，会影响微生物的成长和结果的观察.但是，由于高压灭菌会影响培养基的PH的下降和上升，因此灭菌压力过高或次数过多不能影响培养基的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调整PH后加入.
3.培养基础应清晰，观察细菌生长情况，培养基础加热煮沸后，可用脱脂棉或绒毛过滤，去除沉淀物，必要时可用蛋白清晰处理，使用的琼脂棒应事先清洗干净后使用，以免琼脂中含有杂质影响透明度.
4.安装培养基不得使用铁、铜等容器.最好使用洗净的中性硬质玻璃容器.
5.培养基的灭菌要达到完全灭菌的目的，注意不要因加热而降低营养价值.一般来说，121℃、15min即可.主要原因是:第一，防止实验操作中人为污染样品.
防止被检测出的病原菌因操作不当而造成个人污染.
1.无菌操作要求
1.接种细菌时必须穿工作服，戴工作帽.
2.接种食品样品时，必须穿专用工作服、帽子和拖鞋，放在无菌室缓冲室，工作前用紫外线消毒使用.
3.接种食品样品时，进入无菌室前用肥皂洗手，用75%的酒精棉球擦手.
4.接种使用的吸管、平盘和培养基等必须消毒灭菌，打开未使用的盘子，放置后不能使用，金属器具必须用高压灭菌或95%的酒精燃烧3次后使用.
5.从包装中取出吸管时，吸管的尖端不得接触露出部位，使用吸管接触试管或平盘时，吸管的尖端不得接触试管或平盘的边缘.
6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后，打开试管塞必须用火焰消毒.
7.接种环和针在接种细菌前用火焰烧毁所有金属线，必要时烧毁环和针与棒的连接部，接种结核菌和烈性菌的接种环在沸水中煮沸5min，用火焰烧毁.
8.吸管吸收菌液或样品时，应使用相应的橡胶头吸收，不得直接用口吸收.二.无菌之间的使用要求
1.无菌之间通向外部的窗户必须是双层玻璃，密封，无菌之间的大小不得随意打开缓冲间和拉门，设置0.5-0.7m2的小窗户，以备进入无菌之间传递物品.
2.无菌之间应保持洁净，工作后用2%-3%的煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品.3.在无菌之间使用前后关闭门，打开紫外线灯室内悬挂紫外线灯消毒时，需要30W紫外线灯，距离1.0m，照射时间在30min以上，使用紫外线灯时，请注意不要直接在紫外线下操作，以免损伤4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意进出.如果需要传递物品，可以在窗户上传递.5.无菌之间需要设置空调时，需要过滤装置.
金属器具和培养基、污染和接种的培养物等，必须灭菌后使用.
(1)干热和湿热高压蒸汽锅的灭菌方法1.
灭菌前准备好的(1)所有需要灭菌的东西都要先洗干净，玻璃器具如吸管、平盘用纸包装严密，用金属筒打开上面的通气孔.
(2)安装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好，注射器抽出管芯，用纱布包好.2.放置(1)干热灭菌器:放置物品不能挤压，也不能接触箱子的四壁.
(2)大型高压蒸汽锅:放置灭菌物分别包裹，直接放入消毒筒内，物品之间不得挤压.3.设备检查(1)检查门开关是否灵活，橡胶圈是否损坏，是否平整.
(2)检查压力表蒸汽排出时是否停留在零位置，关闭门和盖子，蒸汽和加热后，观察空气是否泄漏，压力表和温度计表示的情况是否一致，管道是否堵塞.
(3)对于有自动电子程序控制装置的灭菌器，在使用前检查规定的程序，是否符合灭菌处理的要求.4.灭菌处理(1)干热灭菌法:该方法适用于干热时不破损、不变质、不蒸发的物品、玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等灭菌.
①器械容器清洗后干燥，以免附着在表面的污垢炭化.
②灭菌时放置物品不要挤压，不要直接接触底部和箱壁，物品之间留有间隙.
③菌时关闭箱门，接通电源，首先打开排气孔约30min，排除灭菌器中的冷空气，温度上升到160℃调节指示灯，维持1.5?2小时.④灭菌结束后或温度上升时，必须在60℃以下打开箱门.
(2)手提式高压锅或立式压力蒸汽灭菌器的使用应按以下步骤进行:
①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L(重复使用时补充水量，水变混浊需要更换).
②手提式压力锅将顶盖的排气管插入消毒罐内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用).
③盖上盖子拧紧，不漏气的灭菌器放在火源上加热，立式压力锅通过电源，打开顶盖的排气阀放入冷气阀(水沸腾后排气阀10-15min)的灭菌器.
③盖子拧紧顶盖子，不漏气的灭气的灭气体压力，放入火源，立即取消除压力，立即取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力.
⑤取消压力，取消压力，取消压力，取消压力，取消压力.
②夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸汽引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出.
③锅室达到规定的压力和温度时，调节吸气阀，保持恒定④自然或人工冷却到60℃后开门取物，不得使用快速排出蒸汽法，以免突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破.
⑤使用自动程序控制式压力蒸汽灭菌器，放置物品关闭门后，根据物品类别按下相应的开关，按要求自动灭菌，灭菌时必须使用附属仪表记录温度和时间，操作要求严格按照制造商的说明书进行.5.灭菌温度和时间(1)干热灭菌器灭菌温度为160℃，为1.5-2h.(2)压力蒸汽灭菌锅的灭菌温度和时间(2)间歇性灭菌方法1.灭菌方法1.灭菌方法系:压力不大的蒸汽进行灭菌，有些物质通过高压蒸汽灭菌容易破坏，可以用这种方法灭菌.
(1)将想要灭菌的东西放入锅中，盖上盖子，打开排水口，排出器内的馀水.
(2)关闭排水口，打开进气门，必要时消毒10~20min.
(3)灭菌后关闭进气门，取出物品冷却到室温，放入37℃的温箱过夜，第二天用上述方法消毒，这样3次就能达到灭菌的目的.2.血清凝固器的使用方法:如果培养基中含有血清和蛋的特殊成分，高热会破坏营养成分，因此使用低温，可以使血清凝固，达到灭菌目的:(1)使用该法灭菌的血清等分装时，必须严格遵守无菌操作，试管、平盘也必须在灭菌后使用.
(2)根据要求将培养基变成斜面和上层，加入足够的水后，连接电源，升温75~90℃1h灭菌，放入37℃的温箱过夜，这样灭菌3次.3.沸腾消毒:用煮锅或沸腾消毒器，水沸腾后煮5~15次min，水中加入2%的煤酸煮5min，加入0.
02%的甲醛，80℃煮60min达到灭菌目的，但在选择沸腾消毒的增加消剂时，必须注意对物品的腐蚀性.4.灭菌处理:灭菌后的物品，根据正常情况无菌，从灭菌器中取出时，必须仔细检查放置，以免再次污染.
取出(1)物品，立即检查包装的完整性，破坏或棉塞脱落时，不得作为无菌物品使用.
(2)取出的物品，如果包装有明显的浸水者，不得作为无菌物品使用.
(3)培养基或试剂等，必须检查是否符合灭菌后的颜色或状态，未达到的人应废弃.
(4)启闭式容器，取出时应关闭筛孔.
(5)取出的物品掉落在地面或错误地面，不洁净的地面，不洁净的液体，不能作为无尘物品使用的情况下).
四、有毒有菌污物处理要求微生物实验所用实验器材
培养物等未经消毒处理，一律不得带出实验室.
1.培养的污染材料和废弃物应放置在严密的容器和铁丝筐中，集中保管在指定的场所，统一进行高压灭菌.
2、经过微生物污染的培养物，必须经过121℃、30min高压灭菌.3.染菌后的吸管，使用后放入5%的煤酚肥皂溶液和石炭酸液中，至少浸泡24小时(消毒液不得低于浸泡高度)，经过121℃、30min高压灭菌.
4.涂层染色清洗层的液体，一般可直接冲入下水道，烈性菌的清洗液必须冲入杯子中，高压灭菌后倒入下水道，染色的玻璃层浸入5%煤酚皂溶液中24小时后煮沸清洗.
做凝聚试验用的玻璃或平盘，必须在高压灭菌后清洗.5.破碎的培养物，立即用5%的煤酚皂溶液或煤酸液喷洒和浸泡污染部位，浸泡30分钟后擦拭干净.
污染的工作服和强烈试验穿的工作服、帽子、口罩等，必须放入专用的消毒袋中，用高压灭菌后才能洗
由于各种微生物对营养的要求不完全相同，培养目的不同，各种培养基础的准备要求如下:
1.根据培养基础处方的成分量称，溶于蒸馏水，使用前应对应用的试剂药品进行质量检查.
2.pH测定和调节:pH测定必须在培养基冷到室温时进行.在热或冷的情况下，pH有一定的不同，所以测定的情况下，在计算量中加入碱或酸混合后，再进行测试.培养基pH值必须正确.
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