洁净度（沉降菌）的磨练尺度操作规程

1 目的

   确立洁净度（沉降菌）的磨练尺度操作规程，为沉降菌检查职员提供准确的尺度操作方式。

2 局限

适用于本公司洁净度（沉降菌）检查的全历程。

3 责任

QA对本规程的有用执行肩负监视检查责任，QC对本规程的实行认真。

4 程序

4.1概述：本尺度对尘粒及微生物污染划定需举行环境控制的房间或区域。其修建结构、装备及其使用均具有削减对该区域内污染源的介入、发生和滞留的功效。

4.2测试方式

4.2.1方式提要：

     本尺度按国家手艺监视局宣布的《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方式》，接纳沉降法，即通过自然沉降原理网络在空气中的生物粒子于培育基平皿，经若干时间，在相宜的条件下让其滋生到可见的菌落举行计数，以平板培育皿中的菌落数来判断洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

4.2.2仪器

     仪器包罗：培育皿、培育基、恒温培育箱、高压蒸汽灭菌器。

4.2.2.1培育皿

       一样平常接纳f90mm×15mm规格的培育皿。

4.2.2.2培育基

       大豆酪卵白琼脂培育基（TSA）或沙氏培育基（SDA）或用户认可并履历证了的培育基。

4.3测试前的规则：

4.3.1测试状态；

4.3.1.1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须到达划定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在划定值内。洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相顺应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65%之间为宜），同时应知足测试仪器的使用局限。

4.3.1.2沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经由消毒。

4.3.1.3测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须相符生产的要求，并在讲述中注明测试状态。

4.3.1.4静态测试时，培育皿露出时间为30min以上；动态测试时，培育皿露出时间为不大于4h。

4.3.2测试职员：

4.3.2.1测试职员必须穿着相符环境洁净度级其余事情服。

4.3.2.2静态测试时，室内测试职员不得多于2人。

4.3.3测试时间：

4.3.3.1对单向流，如100级净化房间及层流事情台，测试应在净化空调系统正

常运行不少于10min后最先。

4.3.3.2对非单向流，如B级、B级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后最先。

4.3.4注重事项：

4.3.4.1测试用具要作灭菌处置，以确保测试的可靠性、准确性。

4.3.4.2接纳一切措施防止人为对样本的污染。

4.3.4.3对培育基、培育条件及其他参数作详细的纪录。

4.3.4.4由于细菌种类繁多，差异甚大，计数时一样平常用透射光于培育皿后头或正面仔细考察，不要漏计培育皿边缘生长的菌落，并须注重细菌菌落与培育基沉淀物的区别，需要时用显微镜判别。

4.3.4.5采样前应仔细检查每个培育皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

4.3.4.6对于单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流偏向；对于非单向流洁净室（区），采样口向上。

4.3.4.7部署采样点时，至少应只管避开尘粒较集中的回风口；采样时，测试职员应站在采样口的下风侧，并只管少走动。

4.3.4.8培育皿在用于检测时，为阻止培育皿运输或搬动历程造成的影响，宜同时举行对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需露出采样，然后与采样后的培育皿（TSA或SDA）一起放入培育箱内培育，效果应无菌落生长。

4.4测试步骤：

4.4.1采样方式：

4.4.1.1仪器和用具：培育皿。

4.4.1.2方式：

a采样点一样平常在离地面0.8m高度的水平面上平均部署。

b采样点多于5点时，也可以在离地面0.8m～1.5m高度的区域内分层部署，但每层不少于5点。

c打开培育皿盖，使培育基外面露出0.5h，再将培育皿盖盖上后倒置。

                            最少采样点数目

面  积 （m2）	洁 净 度 级 别			面   积 （m2）	洁 净 度 级 别
	A	B	B		A	B	B
＜10	2～3	2	2	≥200～＜400	80	20	6
≥10～＜20	4	2	2	≥400～＜1000	160	40	13
≥20～＜40	8	2	2	≥1000～＜2000	400	100	32
≥40～＜100	16	4	2	2000	800	200	63
≥100～＜200	40	10	3
注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风口面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积。

最少培育皿数

4.4.2培育：

4.4.2.1仪器和用具：培育箱、天平（万分之一）、称量纸、锥形瓶（1000ml、150ml）、量筒（1000ml）、高压蒸汽灭菌锅。

4.4.2.2培育基：

4.4.2.2.1大豆酪卵白琼脂培育基（TSA）：

a） 因素：酪卵白胰酶消化物 15g    大豆粉木瓜卵白酶消化物  5g    氯化钠  5g    琼脂  15g    纯化水   1000ml

b） 制法：取上述因素除琼脂，夹杂，微热消融，调治pH值使灭菌后为7.3±0.2，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿（f90mm）中。加盖后在室温放至凝固。

4.4.2.2.2沙氏培育基（SDA）：

     a）葡萄糖   40g    酪卵白胰酶消化物、动物组织的胃酶消化物等量夹杂  10g     琼脂  15g      纯化水   1000ml

b）制法：取上述因素除琼脂，夹杂，微热消融，调治pH值使灭菌后为5.6±0.2，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿（f90mm）中。加盖后在室温放至凝固。

4.4.2.3方式：所有采样竣事后，将培育皿倒置于恒温培育箱中培育，接纳大豆酪卵白琼脂培育基（TSA）配制的培育皿在30～35℃培育箱中培育，时间不少于2天；接纳沙氏培育基（SDA）配制的培育皿在20～25℃培育箱中培育，时间不少于5天。每批培育基应有对照试验，磨练培育基自己是否污染。可每批选定3只培育皿作对照培育。

4.4.3菌落计数：

4.4.3.1用肉眼直接计数，符号或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。

4.4.3.2若培育皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

4.4.4效果盘算：

4.4.4.1用计数方式得出各个培育皿的菌落数。

4.4.4.2平均菌落数的盘算，见式。

                             M1 M2 … Mn   

平均菌落数M=   

                                 n

式中 M―平均菌落数；

               M1―1号培育皿菌落数；

               M2―2号培育皿菌落数；

               Mn―n号培育皿菌落数；

               n―培育皿总数。

4.4.5效果评定：

     用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。

4.4.5.1洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定尺度。

4.4.5.2在静态测试时，若某洁净室（区）内的沉降菌平均菌落数跨越评定尺度，则必须对此区域先举行消毒，然后重新采样两次，测试效果均须及格。