无菌室浮游菌测试操作规程

1  局限：

    本尺度划定了医药工业无菌室和洁净区中浮游菌的测试条件和测试方式。

    本尺度适用于医药工业无菌室和洁净区，无菌室或局部空气净化区域（包罗洁净事情台）的浮游菌的测试和环境的验证。

2  引用尺度：GB/T 16293.2010

    药品生产治理规范（1998修订）附录。

3  尺度

洁净度级别	活微生物数/ m3
100级	5
10000级	100
100000级	500

4  测试方式

4.1  方式提要

本标本接纳的方式是计数浓度法。即通过网络悬游在空气中的生物性粒子于专门的培育基（选择能证实其能够支持微生物生长的培育基），经若干时间和相宜的生长条件下让其滋生到可见菌落计数，以判断该洁室的微生物浓度。

4.2职员的职责及培训

无菌室的测试职员应举行本专业的培训并获得响应的资格后才气才气推行对无菌室测试的职责，其中包罗涉及的卫生知识和基本的微生物知识。

无菌室的测试职员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相顺应的穿着方式，外面的衣服不能带进100000级以上的区域。

4.3  仪器、辅助装备和培育基

选择合适的浮游菌采样器，包罗接纳无油的抽气泵，较低的气流流速和较大的采样流量，以保证培育基外面的水漫衍被吹干。

本测试需要具备仪器、辅助装备和培育基如下：

a) 浮游菌采样器；

b) 培育皿；

c) 高压消毒锅；

d) 培育基；

e) 恒温培育箱；  

4.4  浮游菌采样器原理

浮游菌采样器一样平常接纳撞击法机理，可分为夹缝式采样器、离心式或针孔式采样器。夹缝式采样器由内部风机将气流吸入，通过采样器的夹缝式平板，将采集空气喷射并撞击到缓慢的平板培育基外面，附着的活微生物粒子经培育后形成菌落。离心式采样器由于内部风机的高速旋转，气流从才样器的前部进入后部流出，在离心力的作用下，空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固型培育条上，附着活的微生物粒子经培育后形成菌落。针孔式采样器是气流通过一个金属盖吸入，盖子上是麋集的经由机械加工的特制小孔，通过风机将网络到的细小的空气直接撞击到平板培育基外面，附着的活物微生物粒子经培育成型后形成菌落。

4.5  测试要点

4.5.1  必须根据仪器的检定周期，定期对测试仪器作检定。应使用检定及格，而且使用有用期内的仪器。

4.5.2  测试仪器未进入被测区域时，若必须，则先洗濯外面吧，或在响应的无菌室内准备和存放（用珍爱罩或其他适当地外罩珍爱仪器）。

4.5.3  在100级无菌室内用纸时，上面应蒙上一张透明不沾尘的笼罩物，在100级的无菌室内不能用铅笔的橡皮。

4.5.4  使用测试仪器时应严酷根听说明书操作。

4.5.4.1  仪器开机，预热到稳固后，方可按说明书的划定对仪器举行校正，同时检查采样流量，并凭证采样量设准时间。

4.5.4.2   采样口必须用使用便于消毒及化学性能稳固的质料制造。

4.5.4.3  采样管严禁渗漏，内壁应滑腻。

4.5.4.4   采样管的长度应凭证测点的高度定，只管削减弯曲。

4.6   培育皿

4.6.1  一样平常接纳φ90mm×15mm规格的培育皿。可凭证所选用采样器选择合适的培育皿。

4.6.2离心式采样器接纳专用的固型培育条

4.7  培育基

     大豆酪卵白琼脂培育基（TSA）或沙氏培育基（SDA）或其他用户认可并履历证的培育基。

4.8 恒温培育箱

    必须定期对恒温培育箱举行效验

4.9  测试步骤；

4.9.1  测试前仪器、培育皿外面必须严酷消毒。

4.9.1.1  采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级无菌室的采样器

宜预先放在被测房间内。

4.9.1.2  用消毒剂擦净培育皿的外外面。

4.9.1.3  采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样竣事，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。

4.9.1.4  采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁举行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。

4.9.1.5  采样者应穿着与被测洁净区域响应的事情服，在转盘上放入或换取培育皿前，双手用消毒剂消毒或带无菌手套操作。

4.9.1.6 采样仪器经消毒后先不放入培育皿，开启浮游菌采样器，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并检查流量并凭证采样量调整设准时间。

4.9.1.7 关闭浮游采样器，放入培育皿，盖上盖子。

4.9.1.8 置采样口于采样点后，开启浮游菌采样器举行采样。

4.10  培育

4.10.1  所有采样竣事后，将培育皿倒置于恒温培育箱中培育。

4.10.2  接纳大豆酪卵白琼脂培育基（TSA）配制的培育经采样后，在30℃～35℃培育箱中培育，时间不得少于2d；接纳沙氏培育基(SDA)配制的培育皿经采样后，在20℃～25℃培育箱中培育，时间不少于5d。

4.10.3每批培育基应有对照试验，磨练培育基自己是否污染。可每批选定3只培育皿作对照培育。

4.11  菌落计数

4.11.1  用肉眼对培育皿上所有的菌落直接计数、符号或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。

4.11.2  若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。

4.12  注重事项

4.12.1 使用前应仔细检查每个培育皿质量，培育基及培育皿有变质、破损或污染的不能用使用的。

4.12.2 对培育基、培育条件及其他参数作详细纪录。

4.12.3 由于细菌种类繁多，差异甚大，计数时一样平常用透射光于培育皿面或真面仔细考察，不要有遗漏计培育皿边缘生长的菌落，并须要菌菌落或培育基沉淀的物区别，需要时用显微镜判别。

5  测试规则

5.1 测试条件

在测试之前要，要对无菌室相关参数举行预先测试，这类测试将会提供测试悬浮粒子的环境条件，例如：这种预先测试或可包罗：

a)  温度和相对湿度的测试。  无菌室的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适

应（无特殊要求时，温度控制在18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间为宜）。同时满

足测试仪器的使用局限；

b)  室内送风量或风速的测试的测试，或压差的测试；

c)  高效过滤器的泄露测试

5.2  测试状态

    静态和动态两种状态均可举行测试。

静态测试时，室内测试职员不得多于2人

浮游菌测试前,被测定无菌室(区)由用户决议是否需要预先消毒.

    浮游菌测试时应标明测试时所接纳的状态和室内测试职员数。

5.3  测试时间

5.3.1  在空态或静态a测试时，对单向流无菌室而言，测试宜在净化空气调治系统正常运行时间不少于10min后最先。对非单向流无菌室，测试宜在净化系统正常运行时间不少于30min后最先。在静态b测试时，对单向流洁净是（区），测试宜在生产操作职员撤离现场并经由10min自净后最先；；对非单向无菌室，测试宜在生产操作职员撤离现场并经由20min自净后最先。

5.3.2  在动态测试时，则须纪录生产最先的时间以及测试时间。

5.4.浮游菌浓度的盘算

5.4.1采样点数目及其部署

5.4.1.1  最少采样点数目

浮游菌的采样点位置可参照GB/T16292-2010

a）事情区测点位置离地0.8～1.5m左右（略高于事人情）。

b）送风口测点位置脱离送风面30cm左右。

c）可在要害装备或要害事情流动局限处增添测点。

5.4.2  最小采样量

浮游菌每次最小采样量见表1。

                             表1最小采样量

洁净级别	采样量 L/次
100级	1000
10000级	500
100000级	100
300000级	100

5.4.3  采样次数

每个采样点一样平常采样一次。

5.4.4  采样注重事项

5.4.4.1  对于单向流无菌室或送风口，采样器采样口朝应正对气流偏向；对于非单向流无菌室，采样口向上。

5.4.4.2  部署采样点时，至少应只管避开尘粒较集中的回风口。

5.4.4.3  采样时，测试职员应站在采样口的下风侧，并只管少走动。

5.4.4.4  接纳一切措施防止采样历程的污染和其他可能对样本的污染。

5.4.4.5  培育皿在用于检查时，为阻止培育皿运输或搬动历程造成的影响，宜同时举行阴性对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不得露出采样皿，然后与采样后的培育皿（TSA或SDA）一起放入培育箱内培育，效果应无菌落生长。

5.5  纪录

测试讲述中应包罗以下内容

a)测试者的名称和地址，测试日期；

b) 测试依据

c)试无菌室的平面位置（需要时标注相邻区域平面位置）；

d)有关测试仪器及其测试方式的形貌：包罗测试环境条件，采样点数目及部署图，测试次数，采样流量，或可能存在的测试方式的换取，测试仪器的检定证书等；若为动态测试，则还应纪录现场操作职员数目及位置，现场运转装备和数目和位置；

e)效果：包罗所有统计盘算资料。

5.6  效果盘算

5.6.1  用计数方式得出各个培育皿的菌落数。

5.6.2  每个测点的浮游菌平均浓度的盘算，见式（1）。

平均浓度（个/m³）= 菌落数/采样量  （1）

例1：某测点采样量为400L，菌落数为1，则：

        平均浓度=1/0.4=2.5个/m³

例2：某测点采样量为2m³，菌落数为3，则：

     平均浓度=3/2=1.5个/m³

5.7  效果评定

5.7.1  每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定的评定尺度中关于细菌浓度的界线。

5.7.2  在静态测试时，若某测点的浮游菌平均浓度跨越评定尺度，则应重新采样两次，两次测试效果均及格才气判为相符。

5.8  一样平常监控

  对于浮游菌的监控，宜设定纠偏限度和警戒限度沿单一偏向呈平行流线而且与气流偏向垂直的断面优势速的气流，以保证无菌室的微生物浓度受到控制。应定期以检查微生物负荷以及消毒剂的效力，并非作倾向剖析。静态和动态的监控都可以接纳该方式。

 对于浮游菌的取样频率次，若是泛起下列情形应思量应修改，在评估以下情形，也应确定其他项目的检测频次：

---------------延续跨越纠偏和警戒限度；

---------------歇工时间比预计延伸；

--------------生产时代，空气净化系统举行任何重大的维修；

--------------常操做纪录放映出倾向性的数据；

--------------消毒规程的改变；

--------------生物污染等；

--------------当生产装备有重大维修或增添装备时；

--------------当无菌室结构区域漫衍有重大更改时。

原文链接：http://www.whdcjh.com/a-761/