无菌室浮游菌测试尺度操作程序		编号：
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1          目的

确立无菌室浮游菌测试尺度操作程序，规范无菌室浮游菌的检测。

2          局限

适用于无菌室（包罗洁净事情台）浮游菌的测试和环境验证。

3          职责

QA、QC职员遵照执行。

4          内容

4.1    参考尺度：GB/T 16293-2010

4.2    测试方式

本测试方式为计数浓度法，即通过网络悬浮在空气中的生物性粒子于专门的培育基（选择能证实其能够支持微生物生长的培育基），经若干时间和相宜的生长条件让其滋生到可见的菌落计数，以判断该无菌室的微生物浓度。

4.3    测试仪器、辅助装备和培育基

浮游菌采样器、培育皿（选用与仪器相顺应的培育皿）、培育基、恒温培育箱、高压蒸汽灭菌器。

4.4    测试状态及测试时间

4.4.1   静态和动态两种状态均可举行测试，静态测试时，室内测试职员不得多于2人。

4.4.2   在静态a测试时，单向流无菌室（区），测试在净化空调系统正常运行时间不少于10分钟后最先；非单向流无菌室（区），测试在净化空调系统正常运行不少于30分钟后最先。在静态b测试时，单向流无菌室（区），测试在生产操作职员撤离现场并经由10分钟自净后最先；非单向流无菌室（区），测试在生产操作职员撤离现场并经由20分钟自净后最先。

4.5    采样点简直定

4.5.1   最少采样点数目见表1，每次最小采样量见表2。

表1 最少采样点数目

面积 m2	洁净度级别
	A级	B级（静态）	B级（动态）及C级	D级
＜10	2~3	2~3	2	2
≥10~＜20	4	4	2	2
≥20~＜40	8	8	2	2
≥40~＜100	16	16	4	2
注：对于A级单向流无菌室（区），包罗A级洁净事情台，面积指的是送风口外面积；对于D级以上的非单向流无菌室（区），面积指的是房间面积。

 

表2 最小采样量

洁净度级别	采样量（L/次）
A级	1000
B级（静态）	1000
B级动态及C级	500
D级	100

 

4.5.2   采样点位置部署宜力争平均，阻止采样点在局部区域过于希罕，采样点根据《洁净区环境监控治理规程》附件×××车间洁净度监测采样点结构图的要求部署，每个采样点一样平常采样一次。

4.5.3   事情区采样点位置离地0.8m~1.5m左右（略高于事人情），送风口测点位置脱离送风面30cm左右，可在要害装备或要害事情流动局限处增添测点。

4.6    测试准备

4.6.1   采样器在进入被测区域前先洁净外面，然后用75%酒精消毒一遍或存放于被测区域内，与被测试区域一起消毒（用于A级无菌室的采样器必须预先放在被测房间内）。

4.6.2   A/B级区接纳一次性培育皿，其它区域按无菌操作要求，在中检室洁净事情台上提前制备培育备用（将灭菌后的培育基用水浴消融，冷却至约50-60℃，Φ90mm培育皿每个倾注约20ml培育基，Φ150mm培每个倾注约30ml培育基），培育皿加盖后在室温下放至凝固。自制好的培育皿在无菌室内存放不跨越48小时，2~8℃保留的培育皿一样平常不跨越1周，一次性培育皿在标注的有用期内使用，过时不得使用。

4.6.3   A/B级区使用的培育皿在区域消毒前一次性传入，随环境一起消毒，在消毒液取用间架子上暂存，在有用期内使用。若需暂且传入，则必须在前一天臭氧消毒前通过C级与B级转达窗传入B级区举行臭氧消毒，第二天使用。传入前外面也必须用75%酒精擦拭。其它区域用培育皿按物品传入要求当天传入使用。

4.6.4   采样前，先用75%酒精洗濯采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面（FKC型浮游空气尘菌采样器用酒精洗濯采样头）。

4.6.5   测试详细操作见“JYQ-Ⅱ型浮游菌采样器尺度操作程序或FKC-1型浮游空气尘菌采样器尺度操作程序”。

4.6.6   采样竣事后，盖上培育皿盖子，在培育皿上标注所有信息（包罗产物批号，放置位置等），将培育皿用相宜的方式捆扎，倒置于30~35℃恒温培育箱中培育，培育时间不少于2天。

4.6.7   培育竣事后逐个检查培育皿，用肉眼对培育皿上所有的菌落直接计数、符号，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。若培育皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

4.7    测试纪录应包罗以下内容

4.7.1  被测试区域名称、测试日期、测试依据、测试者姓名、测试仪器及测试方式的形貌，测试时所接纳的状态和室内测试职员数，采样点数目，测试次数、采样流量，测试效果（包罗所有统计盘算资料）等。

4.7.2  若为动态测试，还应纪录现场操作职员数目，现场装备运转情形等。

4.8    效果盘算

4.8.1   用计数方式得出各个培育皿的菌落数。

4.8.2   每个测点的浮游菌平均浓度盘算按下式举行

4.9    效果评定

4.9.1   每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定评定尺度中的界线。

4.9.2   在静态测试时，若某测点的浮游菌平均菌浓度跨越评定尺度，则应重新采样两次，两次测试效果均及格才气判为相符。

4.9.3   若有跨越划定者，必须实时与生产部门联系，对该区域举行消毒或其它处置，然后重新测试至及格。

4.10 一样平常监控

4.10.1  浮游菌一样平常监控设纠偏限度和警戒限度（限度局限及取样频次见《洁净区环境监控治理规程》），以保证无菌室（区）的微生物浓度受到控制，定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效力，并作倾向剖析。静态和动态的监控都可以接纳该方式。

4.10.2  对于浮游菌的取样频次，若是泛起下列情形应思量修改，在评估以下情形后，也应确定其他项目的检测频次

――延续跨越纠偏限度和警戒限度；

――歇工时间比预计延伸；

――要害区域内发现有污染存在；

――在生产时代，空气净化系统举行任何重大的维修；

――一样平常操作纪录反映出倾向性的数据；

――消毒规程的改变；

――引起生物污染的事故等；

――当生产装备有重大维修或增添装备时；

――当无菌室（区）结构或区域漫衍有重大更改时。

4.11 注重事项

4.11.1     JYQ-Ⅱ型浮游菌采样器经消毒后先不放入培育皿，开启浮游菌采样器，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5分钟，检查流量并凭证采样量调整设定采样时间。

4.11.2     单向流无菌室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流偏向，非单向流无菌室（区），采样口向上。

4.11.3     测试时必须穿着与被测区域洁净度级别要求相顺应并经高压灭菌后的无菌服。

4.11.4     部署采样点时，至少应只管避开尘粒较集中的回风口。

4.11.5     采样竣事，需用75%酒精喷射采样器罩子的内壁和转盘（FKC型浮游空气尘菌采样器喷射采样头和珍爱盖）。

4.11.6     应接纳一切措施防止采样历程的污染和其他可能对样本的污染。

4.11.7     每批培育基应有对照试验，磨练培育基自己是否污染，可每批选定3只培育皿作为对照培育；培育皿在用于检测时，为阻止培育皿运输或搬动历程造成的影响，宜同时举行对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需露出采样，然后与采样后的培育皿一起放入培育箱中培育，效果应无菌落生长。

4.11.8     采样前应仔细检查每个培育皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

4.11.9     由于细菌种类繁多，差异甚大，计数时一样平常用透射光于于培育皿后头或正面仔细考察，不要漏计培育皿边缘生长的菌落，并须注重细菌菌落或培育基沉淀物的区别，需要时用显微镜判别。

4.11.10  必须定期对恒温培育箱举行校验。

5          相关文件

6          附件

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