净化车间沉降菌测试操作规程

1  目的

确立一个净化车间洁净区（室）沉降菌检测的尺度操作程序，保证洁净区微生物检测按规范执行。

2  局限

公司所有洁净区（室）的沉降菌测定和环境的验证。

3  责任者

质量手艺部对本SOP实行认真。

4  程序

4.1  本测试方式接纳沉降法，即通过自然沉降原理网络在空气中的生物粒子于培育基平皿，经若干时间，在相宜的条件下让其滋生到可见的菌落举行计数，以平板培育皿中的菌落数来判断洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区（室）的洁净度。

4.2  所用的仪器和装备

4.2.1  高压蒸汽灭菌器

使用时应严酷根据“高压蒸汽灭菌器操作规程”和说明书操作。

4.2.2  恒温培育箱

必须定期对培育箱的温度计举行检定。

4.2.3  培育皿

接纳Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培育皿。

4.2.4  培育基

4.2.4.1  通俗肉汤琼脂培育基或其他药典认可的培育基。

4.2.4.2  培育基的准备及灭菌

4.2.4.2.1  将Φ90mm的培育皿置于121℃湿热灭菌20min或180℃干热灭菌2h。

4.2.4.2.2 将培育基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培育基注入培育皿，每皿约15ml。

4.2.4.2.3  等琼脂凝固后，将培育基平皿倒置于30℃-35℃恒温培育箱中培育

48h，若培育基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。制备好的培育基平皿宜在2℃-8℃的环境中存放。

4.3  测试步骤

4.3.1  采样方式

将已制备好的培育皿按5.4.1.2的要求放置，打开培育皿盖，使培育基外面露出0.5h，再将培育皿盖盖上后倒置。

4.3.2  培育

4.3.2.1  所有采样竣事后，将培育皿倒置于恒温培育箱中培育。

4.3.2.2  在36℃±1培育箱中培育，时间不少于48h。

4.3.2.3  每批培育基应有对照试验，磨练培育基自己是否污染。可每批选定3只培育皿作对照培育。

4.3.3  菌落计数

4.3.3.1  用肉眼直接计数，符号或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。

4.3.3.2  若培育皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

5 注重事项

5.1  测试用具要作灭菌处置，以确保测试的可靠性、准确性。

5.2  接纳一切措施防止人为对样本的污染。

5.3  对培育基、培育条件及其他参数作详细的纪录。

5.4  由于细菌种类繁多，差异甚大，计数时一样平常用透射光于培育皿后头或正面仔细考察，不要漏计培育皿边缘生长的菌落，并须注重细菌菌落与培育基沉淀物的区别，需要时用显微镜判别。

5.5  采样前应仔细检查每个培育皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

6  测试规则

6.1  测试状态

6.1.1  沉降菌测试前，被测试洁净区（室）的温湿度须到达划定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在划定值内。

6.1.2  沉降菌测试前，被测试洁净区（室）已经由消毒。

6.1.3  测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须相符生产的要求，并在讲述中注明测试状态。

6.2  测试职员

6.2.1  测试人同必须穿着相符环境洁净度级其余事情服。

6.2.2  静态测试时，室内测试职员不得多于二人。

6.3  测试时间

6.3.1  对单向流，如100级净化房间及层流事情台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后最先。

6.3.2  对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后最先。

6.4  沉降菌计数

6.4.1  采样点数目及其部署

6.4.1.1  最少采样点数目

沉降法的最少采样点数可按表1确定。

6.4.1.2  采样点的部署

6.4.1.2.1  事情区采样点的位置离地0.8m~1.5m左右(略高于事人情)。

6.4.1.2.2  可在要害装备或要害事情流动局限处增添采样点。

6.4.1.2.3  采样点位置的详细规则见附图。

6.5  纪录

测试讲述中应纪录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。

测试讲述的编写见附表。

6.6  效果

6.6.1  用计数方式得出各个培育皿的菌落数。

6.6.2平均菌落数的盘算，见下式。

式中：M为平均菌落数

M1为1号培育皿菌落数

M2为2号培育皿菌落数

Mn为n号培育皿菌落数

n为培育皿总数。

6.7  效果评定

用平均菌落数判断洁净区（室）空气中的微生物。100,000级洁净区沉降菌(个／m2)应小于即是l0个；10000级洁净区沉降菌(个／m2)应小于即是3个；100级洁净区沉降菌(个／m2)应小于即是1个。

6.7.1  洁净区(室)内的平均菌落数必须低于所选定的评定尺度。

6.7.2  若某洁净区（区）内的平均菌落数跨越评定尺度，则必须对此区域先举行消毒，然后重新采样两次，测试效果均须及格。

沉降菌测试纪录